Depanarea și optimizarea PCR: Ghidul esențial

Titlul original:

PCR Troubleshooting and Optimization: The Essential Guide

Conținutul cărții:

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) este un instrument fundamental în cercetarea științifică și testarea clinică. PCR în timp real, care combină amplificarea și detecția într-un singur instrument, este o metodă rapidă și precisă pentru detectarea și cuantificarea acizilor nucleici.

Deși PCR este o tehnică foarte puternică, rezultatele obținute sunt valabile numai dacă au fost utilizate controale adecvate. În plus, optimizarea adecvată a condițiilor PCR este necesară pentru generarea de date specifice, repetabile, reproductibile și sensibile. Această carte discută strategiile de pregătire a controalelor și standardelor eficiente pentru PCR, când ar trebui utilizate acestea și cum să se interpreteze informațiile pe care le furnizează.

Ea evidențiază importanța optimizării pentru eficiența, precizia și sensibilitatea metodologiei PCR și oferă îndrumări esențiale privind modul de depanare a reacțiilor ineficiente. Experții în PCR descriu tehnicile de proiectare și optimizare, discută utilizarea controalelor adecvate, explică semnificația curbelor standard și explorează principiile și strategiile necesare pentru depanarea eficientă.

Cartea subliniază importanța pregătirii și calității probelor, a proiectării amorselor, a controlului inhibitorilor, a evitării contaminării ampliconilor și a mediului, a optimizării calității și concentrației reactivilor și a modificării protocolului de ciclism termic pentru sensibilitate și specificitate optime. În plus, capitolele specifice discută istoria PCR, alegerea instrumentarului, aplicațiile PCR în metagenomică, analiza de topire de înaltă rezoluție, orientările MIQE și PCR la scara microlitrului.

Strategiile, sfaturile și sfaturile cuprinse în acest volum concis vor permite omului de știință să optimizeze și să depaneze eficient o gamă largă de tehnici, inclusiv PCR, PCR cu transcriptază inversă, PCR în timp real și PCR cantitativă. Aceasta va fi o carte esențială pentru oricine utilizează tehnologia PCR.